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细胞系作为正常或肿瘤组织的模式细胞被广泛应用于科学研究和药物开发,然而很大一部分的细胞系被错误标记或被其它个体、组织、种系来源的细胞所替代。

随着越来越多的顶级杂志社多次发文呼吁重视细胞交叉污染及错误辨识问题,选择正确真实的细胞的重要性日趋提升,科研工作者在购买细胞前一定要再三思虑,多方寻找,选择好的细胞供应商,选择能提供细胞系鉴定报告的细胞供应者,否则即使你付出再多的努力也都是白白的付诸东流。

为什么要进行细胞系鉴定?

很多生物生物医学领域的研究都采用培养细胞来进行,这些细胞可能是从细胞库(如美国ATCC,American Type Culture Collection)得来,也可能是受赠于其它研究人员;尤其在中国,目前细胞的传播太复杂、无序,很多都不是通过正规途径获得,如友情赠送等。

据统计,约有30%细胞系被交叉污染或错误辨识,因使用了交叉污染或错误辨识的细胞会导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗失败等。不仅浪费大量时间、精力和金钱,还可能造成不可挽回的灾难性后果。为此,很多细胞库现在都要对提交来的细胞系进行鉴定,并对细胞系之间的交叉污染进行监测。

各种杂志多次发出呼吁,要求研究者对细胞进行鉴定,NIH等权威机构也将细胞系鉴定作为基金申请的前提条件。

人源细胞的鉴定——STR鉴定

STR(Short Tandem Repeat,短串联重复序列)基因分型已被ICLAC、ATCC等权威机构作为金标准应用于细胞鉴定,目前主要基于国际身份认证委员会的标准。依据该标准,可以通过多重荧光PCR技术,对人源8个STR位点以及1个性别决定位点进行检测。

非人源细胞的鉴定——种属鉴定

STR鉴定已经成为细胞身份确认的金标准,但是STR鉴定目前只适用于人及小鼠等少数几个种属的细胞,那么对于非人源的细胞我们应该如何去鉴定呢?

通常情况下,对于非人源细胞,我们首先要解决的是交叉污染的问题,确保使用的细胞是所需要的单一来源的细胞。而解决的方法就是细胞的种属鉴定,目前常见的细胞种属鉴定方法有染色体分析、同工酶分析、DNA条码测序及PCR法等。这几种方法中,最常用、最普遍的为PCR法。

PCR法鉴定细胞来源种属

方法一:

针对常用种属的细胞(人、大鼠、小鼠),使用种属特异性的引物进行PCR扩增,用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测目的条带,来判断细胞的种属及是否存在不同种属来源的细胞交叉污染。

鉴定细胞来源种属

左图为包含人源细胞污染的小鼠细胞;右图为单一来源的小鼠细胞

方法二:

提取细胞DNA,用种属复合引物MIX对动物线粒体COXI基因扩增,然后用遗传分析仪对扩增产物进行毛细管电泳检测和分析。

鉴定细胞来源种属2

鉴定细胞来源种属3

扩增结果显示为大鼠细胞,且无其他种属细胞交叉污染

种属鉴定结果判定一般包含两项:是否为单一种属来源细胞以及来源细胞种属

除了必要的种属鉴定外,在使用细胞之前可针对自身需求对细胞进行相关细胞特性的鉴定,如免疫荧光或流式检测等。

普诺赛(Procell)是一家专注于研发和生产原代细胞、肿瘤细胞及细胞培养相关试剂产品的生物高科技企业,可以为各类研究机构提供符合标准规范的原代细胞、肿瘤细胞及相关实验技术服务。

公司已对公司网站上提供的所有人源细胞系进行全面的STR鉴定,经STR鉴定通过的细胞系的鉴定报告将免费提供给所有下单订购细胞的客户!

此外,普诺赛所有在售大鼠细胞系,均应用PCR扩增→凝胶电泳跑胶进行种属鉴定;对于所有在售小鼠细胞系,除了极少数采用PCR扩增→凝胶电泳跑胶之外,其它均应用STR鉴定,以判断培养细胞是否存在种属间的交叉污染,为您的实验保驾护航。

普诺赛将始终确保为客户提供的细胞具有真实性、正确性,无交叉污染,消除客户因购买细胞而产生的质量和真假的后顾之忧,以最大的诚意提供信息最全面的细胞产品。